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【外泌体提取纯化】常见问题大合集 | 细胞上清

活动品牌:CellGS|试剂盒、NTA | 有效期:2022.07.01-2022.08.31

CGS Exo-spin™ 试剂盒是专用于提取细胞上清、尿液、唾液、血清、血浆等其他im体育欢迎你体液中外泌体的试剂盒, 通过沉淀法和SEC法(尺寸排阻色谱)即可从样本中获取大量结构完整的外泌体,操作快速简便,收获外泌体产率高、纯度高。相较于传统的超速离心法,大量节省实验时间。


试剂盒选用——细胞上清



01 Exo-spin™ 外泌体纯化试剂盒如何保存?

产品常温运输。收到产品后,请于4℃保存,可以稳定保存一年。



02 Exo-spin™ 外泌体纯化试剂盒中使用哪种方法分离外泌体?

Exo-spin™ 试剂盒技术结合沉淀法和尺寸排阻色谱法(SEC)。
若样品不需要沉淀,也可单独使用SEC色谱柱。

03 什么是沉淀法?

沉淀法是利用沉淀反应物将组分从样品中以固体物质分离。Exo-spin™ 技术使用这种方法在SEC色谱柱分离前浓缩外泌体。

04 什么是尺寸排阻色谱(SEC)?

SEC尺寸排阻色谱法(Size Exclusion Chromatography)是一种根据粒径大小分离溶液中颗粒的方法,SEC柱采用树脂填充的多孔球形珠。当含有外泌体的溶液加入到SEC柱中时,较小的颗粒将会被捕获在孔中,而较大的分子则不会进入孔中先被洗脱。因此首先洗脱下来的是大分子,小分子或颗粒会滞留在孔中,需要长时间才能洗脱下来。

SEC尺寸排阻色谱法原理示意图



05 Exo-spin™ 色谱柱的树脂孔径是多少?

Exo-spin™ 色谱柱的树脂孔径约为30 nm。

06 Exo-spin™ 色谱柱是即用型吗?

CGS所有的Exo-spin™ 色谱柱都是预先平衡的,可即时使用。

07 Exo-spin™色谱柱如何操作?

10分钟学会使用SEC方法进行外泌体分离: 【外泌体研究】十分钟get外泌体提取方法!

08 Exo-spin™色谱柱可以重复使用吗?

我们不建议重复使用Exo-spin™色谱柱。
如需要重复使用,可重复使用3-5次,但随着使用次数增多会影响提取效率,液体流速可能会降低。


09 沉淀步骤的建议孵育时间多长?

对于所有类型的im体育欢迎你液体(血液除外),1小时或过夜孵育。血液样本需要至少5分钟的孵育时间。


10 使用Exo-spin™柱后,看到柱已经改变了颜色。这是正常的吗?

是的,这是正常现象,色谱柱颜色的变化是由于蛋白质或小分子被滞留在色谱柱中。


11 最后的洗脱液不透明。这是正常的吗?

是的,最后的洗脱液不必是透明的。

12 如何在细胞培养基中浓缩外泌体?

2D培养的细胞上清平均每毫升含1x109个外泌体。当需要处理较大的样本量时,在柱纯化前使用沉淀剂浓缩外泌体。


13 提取的外泌体怎么保存?

短期保存(一周内)置于4℃即可,长期保存请放置于-80℃。

14 培养细胞时,如何去除血清来源的外泌体?

细胞培养时必须使用去除外泌体的血清(如去外泌体胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C3801-0050 )或者无血清培养基,以降低背景值的干扰(牛血清中含有大量牛源外泌体)。

关于血清正确使用及饥饿培养对细胞的影响请查阅:

【外泌体研究】如何正确使用血清?

【外泌体研究】 您的细胞还在挨饿吗?


15 如何鉴定提取的外泌体?

根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》,外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度,TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征,WB检测外泌体标志蛋白。

更多外泌体相关问题,请查阅:【外泌体研究】常见问题大合集

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日期 数量
2022-8 11
2022-9 6
2022-10 4
2022-11 1
2022-12 0
2023-1 0

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